全国100所名校最新高考冲刺卷样卷一2023生物

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大一轮复学案生物学3.人体内的t-PA蛋白能高效降解血栓，是心梗研究基因的表达以及蛋白质的结构与功能之和脑血栓的急救药，但大剂量使用会诱发颅内间的关系。经典的大引物PCR定点诱变技术出血。如果将t-PA蛋白第84位的半胱氨酸成为基于PCR的定点诱变技术中应用最普遍换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。先对天的方法，操作过程如图甲。研究者欲改造某基然的t-PA基因进行序列改造，然后在大肠杆因并将其导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒菌中表达改造后的基因，可得到性能优异的改含有氨苄青霉素抗性基因、LacZ基因及一些良t-PA蛋白。如图是通过重叠延伸PCR获酶切位点，结构如图乙。回答下列问题：取t-PA改良基因和利用质粒pCLYⅡ构建含引物1t-PA改良基因的重组质粒示意图（图中重叠PCR1,目的基因诱变引物延伸PCR过程中，引物a、b用来扩增含有突大引物变位点及其上游序列的DNA片段，引物c、dPCR23,目的基因用来扩增含突变位点及其下游序列的DNA片引物2段)。请回答：引物②t-PA基因目的基因引物a,引物c大引物PCR法定点诱变（圈点为突变位点）XXXXXXPCR1引物b甲引物dPCR2CCGG改良基因产物AB限制酶识别序列及切割位点产物CDSma IXma ICTAGBgiII AGATCTBglINhe I GCTAGCAB上链LacZNhe ISma I CCCGGGCD下链基因Xma I CCCGGG氨苄青霉素PCR3抗性基因LacZ基因编码产生的酶能分解β-半乳糖苷，产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则突变产物AD菌落为白色(t-PA改良基因)复制原点(1)已知t-PA蛋白第84位是半胱氨酸，相应的乙基因模板链（图中t-PA基因的上链）上的碱基(1)利用大引物PCR进行定点诱变需要进行序列是ACA,丝氨酸的密码子是UCU。重叠延伸两轮PCR(PCR1和PCR2),在PCR1中，至少PCR示意图中的点表示突变部位的碱基，引物b需要个循环才能获得相应的大引物中该部位的碱基是,引物c该部位的碱模板。在PCR2中，要获得带有诱变点的改良基是。PCR中需要引物的原因是基因，引物应选用大引物两条链中的(填“①”或“②”)。(2)为实现质粒和改良基因的高效连接，选用(2)重叠延伸PCR中，PCR1和PCR2分别进行，限制酶XmaI而不选用限制酶SmaI的原因产物混合后再进行PCR3。PCR1和PCR2需要是分别进行的原因是为将改良基因构建在质粒上，还需要等酶。(3)在构建改良基因表达载体时，有的质粒含4.(2022山东淄博一模)定点诱变技术是近年来生有改良基因，有的质粒为空白质粒，将含上述物工程研究中发展迅速的一个领域。通过定组件的溶液加人大肠杆菌菌液中，适宜温度下点诱变可以在体外改造目的DNA分子，进而培养一段时间后，再将菌液涂布在含氨苄青霉.374