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21.（11分）河南省伏牛山地区分布着多种耐旱植物，柳是其中重要的生态修复物种。研究发现，怪柳NtNAC1基因的表达产物可显著增强植物对干旱和高盐胁迫的耐受性。某科研团队利用下图所示Ti质粒构建基因表达载体，然后通过农杆菌转化法将NtNAC1基因导人伏牛山濒危植物太行花中，以提高其抗逆性。回答下列问题。BamHIEcoRIα链（模板链）BdXNINAC1基因Barstar基因β链注：LB/RB为T-DNA的左/右边界；中Hyg为潮霉素抗性基因；Ti质粒Barstar基因表达时可以阻止Barnase基因的自毁作用。（1）启动子①应与NtNAC1基因β链的（填“3'”或“5'”）端相连。（2）为验证转化后的农杆菌是否携带重组质粒，该科研团队采用多重PCR技术（一种在单次反应中通过多对引物同时扩增多个目标序列的技术）进行检测。具体方法为：将下表所示的3对引I物加人同一PCR体系中，对转化后的农杆菌DNA进行扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳进行分离检测。引物扩增片段P/P2扩增NtNAC1基因P/P扩增Barnase基因Ps/P6扩增Hyg基因转化成功的农杆菌电泳结果应显示个条带；如果用同样的方法检测转化成功的太行花植株，结果仅显示2个条带，原因是（3）已知组成型启动子可以持续、高效地启动基因的表达，干旱诱导型启动子仅在干旱胁迫下启动基因表达。若将启动子①设计为干旱诱导型启动子，则启动子②应设计为（4）科研团队对转基因太行花进行水验证，结果显示转基因太行花的抗逆性并未达到预期。为提升NtNAC1蛋白的生物活性，科研团队计划通过蛋白质工程对其进行改造。以下是相关步骤（含2个干扰项），请按正确顺序排列：①通过X射线衍射技术分析原始NtNAC1蛋白的盐碱敏感区域空间结构②利用计算机优化原始NtNAC1蛋白三维构象③采用定点突变技术修改NtNAC1基因的脱氧核苷酸序列④通过PCR技术随机诱变NtNAC1基因序列③推导出耐盐碱功能所需的关键氨基酸替换位点6将改造后的NtNAC1基因导人受体细胞并检测其耐盐碱能力?推测出mRNA序列并人工合成新的氨基酸链高三生物学第8页（共8页）
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